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魚和熊掌可兼得!美侖精品推薦:Bradford蛋白濃度測定試劑盒(去垢劑兼容型)
2020-04-10  來源:美侖生物

 

Meilunbio®致力于為中國科學家在生命科學研究領域提供最可靠的工具材料及技術手段,我們專注于基礎科研層面的細胞培養及檢測,蛋白定量提取及免疫印跡等細分領域,愿為中國的醫學、藥學、生物學等產業奠定堅實的研究基礎。

Meilunbio®旗下再添重磅新品,Bradford蛋白濃度測定試劑盒(去垢劑兼容型),產品貨號MA0079

測定蛋白濃度對大多數通過生化方法來提取、分離和分析蛋白的實驗和工作流程而言,準確定量總蛋白質濃度都是關鍵步驟。通常,蛋白定量方法的選擇基于多個因素,包括與待分析樣品緩沖液成分的兼容性。我們針對采用熒光計、光譜儀和酶標儀進行熒光法或比色法蛋白定量檢測的應用,提供了各種檢測試劑、試劑盒和標準品。但是針對常見的BCA法和Bradford法,各自存在一些應用限制。

BCA試劑盒線性好,兼容去垢劑,但是操作很麻煩,不兼容還原劑,

Bradford試劑盒操作簡單,兼容還原劑,但是不兼容去垢劑,不能使用常規各種裂解液(基本都含去垢劑),

都想用含去垢劑的裂解液,因為效果好,但是又不想操作麻煩,或者碰巧我的前期實驗中會引入還原劑如DTT(很常見?。┗蛘咩~離子螯合劑如EDTA(很常見?。?o:p>

怎么辦??魚和熊掌不可兼得,來美侖,魚和熊掌可以兼得,美侖新品去垢劑兼容型Bradford蛋白濃度測定試劑盒;讓您魚和熊掌都可兼得

 

貨號

品名

規格

原價

MA0079

Bradford蛋白濃度測定試劑盒(去垢劑兼容型)

800T

380

(活動規則見底部)

 

 

BCA 法和 Lowry 法定量  

Bradford法和染料法定量 

熒光法定量

線性工作范圍  

常規方案 20–2,000 µg/mL
增強方案 0.5–40 µg/mL

常規方案 100-1,500 µg/mL
增強方案 1-25 µg/mL

10 ng/mL 至 150 µg/mL
50 µg/mL 至 5 mg/mL

檢測原理

堿性環境下蛋白質與Cu2+絡合并將Cu2+還原成Cu1+。BCA與Cu1+結合形成穩定的紫藍色復合物,在562 nM處有高的光吸收值并與蛋白質濃度成正比,據此可測定蛋白質濃度。

在試劑的酸性環境中,蛋白和考馬斯染料結合。這導致染料的最大吸收發生位移,從紅棕色形式(最大吸收峰 465nm)轉化為藍色形式(最大吸收峰 610nm)。染料的兩種形式在 595nm 處差異最大,因此 595nm 是測定考馬斯染料-蛋白復合物的藍色的最佳波長。

不同的檢測機理取決于具體的檢測方法,但通常檢測試劑在結合蛋白之前是不發熒光的

優點

· 兼容大多數去垢劑——即使樣品中去垢劑濃度高達 5%

· 線性反應曲線(R2 > 0.95)

· 該方法的蛋白質間差異性小于考馬斯法(Bradford 法)

· 所有蛋白質定量方法中最快速最簡單 

· 室溫下進行

· 與大多數鹽離子、溶劑、緩沖劑、硫醇、還原性物質和金屬螯合劑兼容

· 出色的靈敏度,定量所需蛋白質樣品的量更少

· 時間不是關鍵因素,因此該分析方法可以適應高通量應用中的自動化處理

· 蛋白間一致性好

缺點

· 在 BCA法中,能還原銅離子的物質也能造成顯色,從而影響蛋白定量的準確性。

· 與銅離子螯合的試劑,DTT 等常見還原劑和特定的單個氨基酸也會在 BCA 檢測中顯色(半胱氨酸或胱氨酸、酪氨酸和色氨酸)

· 使用傳統 BCA 法獲得最佳靈敏度所需的時間和孵育溫度(37°C 或 60°C)

· 與通常用于溶解膜蛋白的高濃度去垢劑不兼容

· 與基于銅的測定法相比,蛋白質之間的差異性較大

 

需要專用設備或具有熒光功能的酶標儀

 

傳統常見的檢測試劑盒及優缺點比較如下

總結下來,

BCA試劑盒

優點:線性好,兼容去垢劑,可以適用于大部分類似RIPA,NP-40等各種裂解液,

缺點:操作步驟繁瑣,需要做標準曲線,時間長,不兼容DTT,巰基乙醇等還原劑、金屬螯合劑

Bradford法試劑盒

優點:操作步驟簡單,時間短,兼容DDT,巰基乙醇等還原劑,金屬螯合劑等。

缺點:非線性,不兼容去垢劑,不適合大部分類似RIPA,NP-40等常規裂解液。

基于此,美侖推出Bradford蛋白濃度測定試劑盒(去垢劑兼容型)

優點:完美結合以上倆種試劑盒的優點,成功避開其缺點??蛇m用于常規含去垢劑的裂解液獲得的蛋白樣品測定,兼容各類還原劑,同時具備線性好,操作快的優點。

 

產品簡介

Bradford蛋白濃度測定方法,是常用的經典蛋白濃度檢測方法,在酸性條件下,考馬斯亮藍G250染料能與蛋白質的堿性和芳香族氨基酸迅速結合,可通過檢測溶液595nm處吸光值,計算蛋白質濃度,吸光值與蛋白質濃度在一定范圍內有較好的線性關系。經典Bradford法與BCA法相比,可以兼容更高濃度的還原劑,并且檢測速度極快,但卻無法兼容蛋白提取時常用的去垢劑,而本試劑盒在保留Bradford法原有優點的同時,能夠兼容各種常用去垢劑。

本試劑盒Bradford檢測試劑溶液呈綠色,在與蛋白質結合后變為藍色,顏色隨蛋白濃度增加而逐漸加深。本試劑盒在測定蛋白質濃度時,可以兼容濃度1% SDS、1% NP-40、1% Triton X-100、1% Brij35和1% Tween 20等多種去垢劑,而且兼容我公司現有的所有蛋白裂解液。本試劑盒經過精心優化,可在上述去垢劑存在條件下,蛋白質樣品或者標準品BSA濃度在0.1-0.5mg/ml范圍內,標準曲線R2值可在0.995以上。

 

產品優勢

 

兼容性好,可兼容常用去垢劑和蛋白裂解液

結果穩定,1小時內都可以對進行檢測

快速檢測,5分鐘即可完成蛋白定量時間

結果準確,線性相關性好,斜率高

 

實驗數據

 

圖1. 上圖是在去垢劑和蛋白裂解液存在時,蛋白標準曲線的實際檢測結果。線性良好標準曲線R2值可在0.995以上。

 

 

 

圖2.上圖是RIPA強蛋白裂解液稀釋蛋白標準溶液時,每隔5min檢測吸光值結果。結果表明本產品在1小時內的吸光值變化很小。

 

保存條件

 4℃保存,一年有效。標準蛋白溶液BSA長期不用可放置在-20℃保存。

 

注意事項

1. 當去垢劑濃度大于1%時,部分去垢劑和去垢劑組合仍然適用于Bradford蛋白定量試劑(去垢劑兼容型),但可能會出現斜率降低的現象,影響結果準確度。

2. 本產品長時間不用會有少量沉淀產生,在使用前請將檢測試劑上下翻轉混勻。

3. 本產品建議蛋白標準濃度范圍是0.1-0.5mg/ml,如果因實驗需要擴大蛋白標準濃度范圍后出現標準曲線線性不好的現象,可將蛋白標準溶液和蛋白樣品與檢測試劑的體積比例改為5:300。

4. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

操作步驟

1. 制備蛋白標準溶液

將20mg/ml的蛋白標準溶液按照下表進行稀釋,注意在稀釋時盡量保證蛋白標準溶液的稀釋液與待檢測蛋白樣品的溶劑相同,在稀釋時要保證每個濃度的標準蛋白溶液都充分混勻。以下表格內的體積適用于96孔酶標板測定,如使用分光光度計測定,按實際需要擴大溶液體積。

編號

稀釋液體(ul)

蛋白標準溶液體積

最終濃度(mg/ml)

A

97.5

從蛋白標準溶液BSA取2.5ul

0.5

B

20

從A管取80ul

0.4

C

20

從B管取60ul

0.3

D

20

從C管取40ul

0.2

E

20

從C管取20ul

0.15

F

20

從D管取20ul

0.1

G

20

0

0

 

2. 蛋白標準和蛋白樣品濃度測定

1) 取10ul上步驟已稀釋好的不同濃度蛋白標準溶液依次加入到96孔酶標板中;

2) 取10ul待測蛋白樣品加入到96孔酶標板中。注意如蛋白樣品濃度過大,需要用同蛋白標準稀釋液相同的溶液稀釋蛋白樣品。

3) 每孔加入300ul Bradford蛋白定量試劑(去垢劑兼容型)。用手輕彈酶標板混勻,室溫放置3-5min,注意不可以使用酶標儀震板功能,防止液體灑出污染機器。

4) 設置酶標儀測定595nm的吸光值,以不含BSA的吸光值做為空白對照。

5) 以蛋白標準液的濃度為橫坐標,吸光值為縱坐標,繪制標準曲線,注意將零點去除,得出標準曲線線性公式及R2值。

6) 按照上述步驟所得公式,根據所測得的蛋白樣品吸光值,計算蛋白樣品的濃度。

7) 如使用分光光度計測定,可根據實際需要擴大溶液體積,保證蛋白標準溶液和蛋白樣品與Bradford蛋白定量試劑的體積比為10:300,例如,如果需要1.5ml,可取蛋白樣品50ul,Bradford蛋白定量試劑1.5ml。

 

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貨號

品名

規格

原價

MA0079

Bradford蛋白濃度測定試劑盒(去垢劑兼容型)

800T/盒

380

MA0081

Bradford法蛋白定量試劑盒

1000T

130

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200T

150

MA0082-2

BCA蛋白定量/濃度測定試劑盒

500T

290

MA0082-3

BCA蛋白定量/濃度測定試劑盒

5000T

1430

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100ml

170

MA0151

RIPA裂解液(強)

100ML

220

MA0152

RIPA裂解液(中)

100ML

180

MA0153

RIPA裂解液(弱)

100ML

160

MA0156

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100ML

160

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50T

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MA0171

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100T

600

 

活動規則:

1、轉發此文章到朋友圈(不要設置權限哦),終端科研用戶即可免費獲得 MA0079體驗裝 100T一份。

2、每個課題組限領5份,每個簽約經銷商限領20份。

3、活動時間:2020年4月10日至2020年6月30日。

 

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